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1、不同杀菌剂对桃褐腐病菌的毒力纪兆林,蒋长根,戴慧。炀从眩ㄑ镏荽笱г耙沼胫参锉;ぱг,扬州,225009)摘 要:桃褐腐病是桃树上的一种重要病害。本文采用菌丝生长抑制法测定了8类15种杀菌剂对桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)的毒力效果。结果表明毒力作用很强的杀菌剂是咪鲜胺,EC50值为0.0085 gmL-1;其次是己唑醇、烯唑醇、苯醚甲环唑、丙环唑、戊唑醇和多菌灵,EC50值分别为0.0207、0.0397、。0.0506、0.0627、0.0802和0.0840 gmL-1。在保护性杀菌剂中,福美双要优于代森锰锌。而新型杀菌剂嘧菌酯对褐腐病菌的抑菌作用弱,EC50值

2、为51.5900 gmL-1。关键词:桃;桃褐腐。簧本粒欢玖Σ舛╒irulence of Fungicides to Peach Brown Rot Pathogen under Laboratory ConditionsJi Zhao-lin, Jiang Chang-gen, Xu Jing-you(College of Horticulture and Plant Protection, Yangzhou University, Yangzhou, 225009)Abstract: Peach brown rot is an important disease in peach-gr

3、owing areas. The laboratory virulence of 15 fungicides from 8 classes against peach brown rot pathogen Monilinia fructicola was tested by mycelial growth rate method. The results showed that prochloraz had the strongest virulence, with EC50 value of 0.0085 gmL-1, and hexaconazole, diniconazole, dife

4、noconazole, propiconazole, tebuconazole and carbendazim had better antimicrobial effects, with EC50 values of 0.0207 gmL-1, 0.0397gmL-1, 0.0506gmL-1, 0.0627gmL-1, 0.0802gmL-1 and 0.0840 gmL-1, respectively. Among protective fungicides, the virulence of thiram was higher than that of mancozeb. Azoxys

5、trobin, however, had very low virulence to M. fructicola, with EC50 value of 51.5900 gmL-1.Key words: peach; peach brown rot (Monilinia fructicola); fungicides; virulence test桃褐腐病是严重:μ疑闹匾『χ,世界性分布,我国南北方均有发生,尤其以浙江山东等沿海地区和江淮流域的桃产区发生最重1-2。该病主要由果生链核盘菌Monilinia fructicola(G. Wint.)Honey引起3,该病菌主要:闹鞯

6、果实,引起果腐,造成大量的经济损失,已成为桃生产中的一大障碍4-5。目前化学防治是控制该病害的主要手段1,但果园防治桃褐腐病的药剂种类繁多,田间防效参差不齐,会出现施药次数增多、用药成本增加、产生抗药性等问题,为了更加有效地开展桃褐腐病的化学防治,笔者选用了目前生产上广泛使用的8类15种杀菌剂对桃褐腐病菌进行了室内毒力测定,以期筛选出具有强抑菌作用的药剂,为后续的田间药效试验奠定基。哉页龇乐胃貌〉挠行б┘。1 材料与方法1.1 供试菌株 桃褐腐病菌(Monilinia fructicola),为实验室保存菌株。试验前于PDA平板上活化。1.2 供试药剂根据结构及其杀菌机理,供试药剂共有8类

7、15种,包括保护性杀菌剂2类3种。有机硫类:代森锰锌、福美双;取代苯类:百菌清。治疗性杀菌剂6类12种,包括三唑类6种6种:三唑酮、烯唑醇、戊唑醇、丙环唑、己唑醇、苯醚甲环唑;咪唑类1种:咪鲜胺;苯并咪唑类2种:多菌灵、甲基硫菌灵;二甲酰亚胺类1种:腐霉利;苯胺基嘧啶类1种:嘧菌环胺;甲氧基丙烯酸酯类1种:嘧菌酯。15种原药有效成分含量及生产厂家分别是:90.2%代森锰锌和95.5%福美双(南通宝叶化工有限公司),98%百菌清(利民化工股份有限公司),95%三唑酮(江苏省建湖农药厂),92%烯唑醇(江苏建农农药化工有限公司),95%戊唑醇(张家港农药厂),95%丙环唑(浙江禾本农药化学有限公司

8、),95%己唑醇(张家港七洲农药化工有限公司),96.3%苯醚甲环唑(江苏耕耘化学有限公司),96%咪鲜胺(江苏辉丰农化有限公司),98%多菌灵(太仓市农药厂有限公司),96%甲基硫菌灵(江苏新沂农药有限公司),99.2%腐霉利(日本住友化学工业株式会社),99.2%嘧菌环胺(江苏中旗化工有限公司),97.5%嘧菌酯(泰州百力化学有限公司)。1.3 毒力测定方法多菌灵原药用HCl溶解,代森锰锌原药用二甲基亚砜溶解,其它农药原药用丙酮或甲醇溶解,原药溶解后用灭菌水适当稀释,配制成1104 gmL-1母液。用无菌水将各药剂稀释配制成不同浓度的含药PDA平板。取培养5天的病菌菌落,用打孔器打取直径为

9、6 mm的菌饼,移入含药PDA平板中央,每皿接一个菌饼。每处理4次重复,另设不含药培养基为对照。接菌后将PDA平板置入25C培养箱培养,5 d后用直尺测量菌落直径,每个菌落按十字交叉法测量2次,以其平均数代表菌落的大小。计算各处理菌落增长直径和各处理浓度对供试菌株菌丝生长抑制率(%)。D = D1 D2(D 为菌落增长直径;D1为菌落直径;D2为菌饼直径)I = (D0 Dt)/D0 100%(I 为菌丝生长抑制率(%);D0为空白对照菌落增长直径;Dt为药剂处理菌落增长直径)根据药剂浓度对数(横坐标)及对应的菌丝生长抑制率几率值(纵坐标)作回归分析,求出毒力回归方程Y=a+bx,并计算出药剂

10、抑制中浓度(EC50)和相关系数,根据EC50值评价杀菌剂毒力即抑菌能力:很强,EC500.01 gmL-1;强,EC50为0.010.1 gmL-1;较强,EC50为0.11.0 gmL-1;中等,EC50为1.05.0 gmL-1;较弱,EC50为5.010.0 gmL-1;弱,EC5010.0 gmL-1。2 结果与分析2.1 不同杀菌剂对褐腐病菌的EC50值比较根据菌丝生长抑制率,计算出不同药剂对褐腐病菌的毒力回归方程、有效抑制中浓度(EC50值)和相关系数(见表1)。药剂EC50值的大小是衡量药剂毒力大小的重要指标,EC50值越小表明该药剂的毒力越强。毒力测定结果显示,抑菌能力很强的

11、药剂为咪鲜胺,EC50为0.0085 gmL-1;抑菌能力强的有己唑醇、烯唑醇、苯醚甲环唑、丙环唑、戊唑醇和多菌灵,EC50分别为0.0207、0.0397、0.0506、0.0627、0.0802、0.0840 gmL-1;抑菌能力较强的为甲基硫菌灵,EC50为0.5990 gmL-1;抑菌能力中等的是百菌清、三唑酮、腐霉利和嘧菌环胺,EC50分别为1.0010、1.0519、1.8017、1.8708 gmL-1;抑菌能力弱的是福美双、代森锰锌和嘧菌酯,EC50分别为12.7500、15.3209和51.5900 gmL-1。2.2 褐腐病菌对杀菌剂的敏感性比较从毒力回归方程的角度进行比较

12、,根据回归方程的大小与病菌对药剂的敏感性成正比,斜率越大则说明病菌对药剂的敏感度越高。由表1可看出,杀菌剂对褐腐病菌毒力回归方程的斜率大多在0.20750.4437之间,只有多菌灵的斜率较大,为0.8825,说明在供试药剂中,褐腐病菌对多菌灵要敏感些。表1 不同杀菌剂对桃褐腐病菌的毒力(EC50)药剂毒力回归方程相关系数(R)EC50/gmL-1抑菌能力咪鲜胺y=1.0306+0.2560x0.97540.0085很强己唑醇y=0.9832+0.2869x0.98560.0207强烯唑醇y=1.0211+0.3718x0.97780.0397强苯醚甲环唑y=0.7688+0.2075x0.99

13、260.0506强丙环唑y=1.0013+0.4169x0.99760.0627强戊唑醇y=0.9132+0.3771x0.98430.0802强多菌灵y=1.4493+0.8825x0.94350.0840强甲基硫菌灵y=0.5900+0.4044x0.95480.5990较强百菌清y=0.4998+0.3819x0.94471.0010中三唑酮y=0.4913+0.3960x0.97421.0519中腐霉利y=0.3943+0.4134x0.96461.8017中嘧菌环胺y=0.4250+0.2757x0.98291.8708中福美双y=0.0793+0.3806x0.993212.750

14、0弱代森锰锌y=0.0252+0.4431x0.964415.3209弱嘧菌酯y=0.1371+0.2119x0.934851.5900弱3 结论与讨论室内毒力测定表明,15种药剂对桃褐腐病菌菌丝生长都有不同程度的抑制作用。从EC50值来看,抑菌能力最强的药剂是咪鲜胺,其次是己唑醇、烯唑醇、苯醚甲环唑、丙环唑、戊唑醇、多菌灵等。在供试三唑类药剂中,除了三唑酮的抑菌能力中等以外,其它三唑类药剂的抑菌能力都强。嘧菌酯、嘧菌环胺等新型杀菌剂同三唑类、咪唑类等杀菌剂无交互抗性,对敏感或抗性病原菌均有优异的活性,但本试验发现二者对褐腐病菌的抑制作用较差,特别是嘧菌酯,EC50达到了51.5900 gmL

15、-1。在保护性杀菌剂中,福美双要略优于代森锰锌,但二者的抑菌能力均弱,在生产上单独使用很难达到较好的防治效果。甲基硫菌灵与多菌灵的作用机理相同,因为甲基硫菌灵在植物体内最终通过转化成多菌灵才起作用6,但本试验发现甲基硫菌灵的抑菌作用(EC50为0.5990 gmL-1)明显低于多菌灵(EC50为0.0840 gmL-1),我们分析这可能与甲基硫菌灵在室内实验条件下较难转化成多菌灵有关。 何献声7用19种杀菌剂对桃褐腐病菌进行抑菌活性测定,结果表明戊唑醇、多菌灵具有较高的抑菌活性,而代森锰锌和嘧菌酯的抑菌活性较弱,这与我们的试验结果相一致。陈笑瑜等8测定了北京平谷区桃园125 株桃褐腐病菌(M.

16、 fructicola)对甲基硫菌灵和戊唑醇的敏感性,甲基硫菌灵对病菌的EC50主要分布在1.010-50.2 gmL-1,戊唑醇的EC50主要分布在0.0060.022 gmL-1之间,而本试验甲基硫菌灵和戊唑醇对褐腐病菌的EC50分别为0.5990和0.0802 gmL-1,均略高出了上述范围,这可能与菌株采集地药剂使用水平有关。咪鲜胺为咪唑类杀菌剂,通过抑制麦角甾醇的生物合成,从而使菌体细胞膜功能受破坏而起作用,在国内外广泛用于防治由多种病原真菌引起的谷类、油料及经济作物病害9-10,但在果树病害防治上应用较少。本研究显示,具有保护和治疗双重作用的咪鲜胺杀菌剂对桃褐腐病菌具有很强的抑菌能

17、力,因此在桃褐腐病防治上有很好的应用前景。据报道桃褐腐病菌已开始对包括咪唑类和三唑类杀菌剂在内的脱甲基抑制剂(DMI)类杀菌剂产生了抗性11-12,因此在田间防治桃褐腐病时,应选用三唑类、咪唑类与其它种类杀菌剂混用、复配或交替使用,以延缓抗性产生。根据室内毒力测定,咪鲜胺、己唑醇、烯唑醇、苯醚甲环唑、丙环唑、戊唑醇和多菌灵等治疗内吸性药剂可用于桃褐腐病的防治,但田间防治效果如何尚需进一步试验;防治技术以及不同类型药剂的复配防效有待进一步探讨。参 考 文 献1 Ogawa J M, Zehr E I, Bird G W, et al. Compendium of stone fruit dise

18、asesM. American Phytopathological Society Press, St. Paul, Minnesota, USA, 1995, 7-102 李世访, 陈 策. 桃褐腐病的发生和防治J. 植物保护, 2009, 35(2): 134-139.3 Batra L R. World species of Monilinia (fungi): Their ecology, biosystematics and controlJ. Mycologia Memoir, Berlin: Stuttgart, 1991, 16: 1-2464 Lane C R. A syno

19、ptic key for differentiation of Monilinia fructicola, M. fructigena and M. laxa, based on examination of cultural charactersJ. Bulletin OEPP, 2002, 32(3): 489-4935 陈笑瑜, 国立耘, 骆 勇, 等. 北京桃褐腐病调查C/马占鸿, 吴元华, 简桂良. 植物病理学研究进展. 北京: 中国农业科学技术出kok电子竞技社, 2003, 167-1696 李红霞, 陆悦健, 周明国. 苯并咪唑类杀菌剂的研究进展C/周明国. 中国植物病害化学防治研究(第3

20、卷). 北京: 中国农业科学技术出kok电子竞技社, 2002, 24-327 何献声. 19种杀菌剂对桃褐腐病离体抑菌活性J. 农药, 2011, 50(11): 853-8548 陈笑瑜, 师迎春, 骆 勇, 等. 桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)对3种杀菌剂的敏感性J. 植物保护,2006, 32(3): 25-289 陈 平, 柳训才. 咪鲜胺的应用概况及其残留检测研究J. 湖北农业科学, 2007, 46(3): 478-48010 Copping L G, Birchmore R J, Wright K, et al. Structure-activity relatio

21、nships in a group of imidazole-l-carboxamidesJ. Pesticide Science, 1984, 15(3): 280-28411 Luo C X, Schnabel G. The cytochrome P450 lanosterol 14alpha-demethylase gene is a demethylation inhibitor fungicide resistance determinant in Monilinia fructicola field isolates from GeorgiaJ. Applied and Environmental Microbiology, 2008, 74(2): 359-36612 尹良芬, 胡勐郡, 金 鑫, 等. 桃褐腐病菌抗药性分子机理研究进展J. 植物保护, 2010, 36(5): 28-32

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