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1、实验一实验一 血液学普通检查血液学普通检查 内容内容 血红蛋白测定氰血红蛋白测定氰化高铁血红蛋白测化高铁血红蛋白测定法定法白细胞计数白细胞计数White White Blood Cell CountBlood Cell Count 1.1.血红蛋白测定血红蛋白测定-氰化高铁血红蛋白氰化高铁血红蛋白HiCNHiCN测定法测定法 n该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保管等优点，被国际血液学规范化委员会管等优点，被国际血液学规范化委员会(ICSH)(ICSH)引引荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。血液在

2、血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被高铁氰化钾高铁氰化钾K3Fe(CN)6K3Fe(CN)6氧化为高铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白HiHi，后者与氰离子，后者与氰离子CN-CN-结合生成稳定结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白的棕红色氰化高铁血红蛋白HiCNHiCN。在特定。在特定波长波长540nm540nm和光径比色杯内径和光径比色杯内径1.0cm1.0cm条条件下具有一定的吸光度，经过用规范液制备的件下具有一定的吸光度，经过用规范液制备的规范曲线，可求出血红蛋白浓度来。规范曲线，可求出血红蛋白浓度来。 原原 理理Hb Hi+ CN- Hb Hi+ CN-

3、 HiCNHiCNK3Fe(CN)6K3Fe(CN)6n试剂n血红蛋白转化液文齐氏液：n氰 化 钾 K C N 0.05gn高铁氰化钾K3Fe(CN)6 0.20gn无水磷酸二氢钾KH2PO4 0.14gnT r i t o n X 1 0 0 1.0mln蒸馏水 加至1000ml器材器材1.血红蛋白吸管，血红蛋白吸管，5ml吸管吸管2.大试管大试管3.722分光光度计分光光度计上述试剂为淡黄色上述试剂为淡黄色溶液，储存于棕色溶液，储存于棕色瓶中室温保管，其瓶中室温保管，其中非离子外表活性中非离子外表活性剂可加速溶血，缩剂可加速溶血，缩短转化时间，防止短转化时间，防止因血浆蛋白改动引因血浆蛋白

4、改动引起的混浊起的混浊标本来源标本来源EDTA-K2抗抗凝全血或毛细凝全血或毛细血管采血血管采血 操作操作 1.1.取血红蛋白转化液取血红蛋白转化液5.0ml5.0ml参与大参与大试管中。试管中。2.2.用血红蛋白吸管汲取全血用血红蛋白吸管汲取全血2020l l，轻拭管尖外余血，并准确调理血柱轻拭管尖外余血，并准确调理血柱液面至液面至2020l l。参与到预备好的血红。参与到预备好的血红蛋白转化液底部，并用上清液吸、蛋白转化液底部，并用上清液吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内剩余血吐两次洗净血红蛋白吸管内剩余血液，充分混匀，静置液，充分混匀，静置5 5分钟。分钟。3.3.于于722722分光光度计上

5、以转化液为分光光度计上以转化液为空白进展比色测定，波长空白进展比色测定，波长540nm,540nm,光光径径1.0cm1.0cm。4.4.经过规范曲线间接求出血液中经过规范曲线间接求出血液中HbHb的含量的含量501001502000.1300.2600.4000.5300501001502002501234浓度吸光度吸光度吸光度浓度浓度吸光度吸光度浓度浓度吸光度吸光度浓度浓度吸光度吸光度浓度浓度吸光度吸光度浓度浓度0.10038.20.20076.30.300114.50.400152.70.500190.80.10540.10.20578.20.305116.40.405154.60.50

6、5192.70.11042.00.21080.20.310118.30.410156.50.510194.70.11543.90.21582.10.315120.20.415158.40.515196.60.12045.80.22084.00.320122.10.420160.30.520198.50.12547.70.22585.90.325124.00.425162.20.525200.40.13049.60.23087.80.330126.00.430164.10.530202.30.13551.50.23589.70.335127.90.435166.00.535204.20.1405

7、3.40.24091.60.340129.80.440167.90.540206.10.14555.30.24593.50.345131.70.445169.80.545208.00.15057.30.25095.40.350133.60.450171.80.550209.90.15559.20.25597.30.355135.50.455173.70.555211.80.16061.10.26099.20.360137.40.460175.60.560213.70.16563.00.265101.10.365139.30.465177.50.565215.60.17064.90.270103

8、.10.370141.20.470179.40.570217.60.17566.80.275105.00.375143.10.475181.30.575219.50.18068.70.280106.90.380145.00.480183.20.580221.40.18570.60.285108.80.385146.90.485185.10.585223.30.19072.50.290110.70.390148.90.490187.00.590225.20.19574.40.295112.60.395150.80.495188.90.595227.1血 红 蛋 白 标 准 浓 度 （g/L）血

9、红 蛋 白 标 准 浓 度 （g/L）波长 540nm波长 540nm比色杯直径 1cm 仪器号: 20000448比色杯直径 1cm 仪器号: 20000448q将将HiCNHiCN规范液倍比稀释如规范液倍比稀释如50g/L50g/L、100g/L100g/L、150g/L150g/L、200g/L200g/L后后, ,在所用的分光光度计上在所用的分光光度计上540nm540nm处，光径处，光径1.0cm1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以规范品血红以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以规范品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制规范曲线蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标

10、，绘制规范曲线, ,或求出换算常数或求出换算常数K(K=Hb/A)K(K=Hb/A)。那么经过待测标本吸光。那么经过待测标本吸光度值查规范曲线或用度值查规范曲线或用K K值计算血红蛋白浓度值计算血红蛋白浓度Hb=KHb=KA A。标准浓度标准吸光度500.1201000.2601500.4002000.530501001502000.1300.2600.4000.5300501001502002501234浓度吸光度 附附HiCNHiCN规范曲线绘制和规范曲线绘制和K K值计算：值计算： 参考值参考值 成年男性：成年男性： 120120160160g/Lg/L成年女性：成年女性： 110110

11、150150g/Lg/L新生儿：新生儿： 170170200200g/Lg/L 本卷须知本卷须知 1.1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保管、试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保管、运用中需妥善。运用中需妥善。2.2.规范曲线或规范曲线或K K值，应定期检查、校准。值，应定期检查、校准。3.7223.722分光光度计的运用：转化液作空白分光光度计的运用：转化液作空白( (可共用可共用) )。透。透射比方式，开盖调射比方式，开盖调0 0，闭盖调，闭盖调100100；吸光度方式比色。；吸光度方式比色。 kok电子竞技方式kok电子竞技方式 吸光度：吸光度：HbHb：_g/L_g/L小数点后留一位小数点后留

12、一位2.2.白细胞计数白细胞计数 原理原理 血液用白细胞稀释液血液用白细胞稀释液2%2%醋酸溶液稀释，使红细胞醋酸溶液稀释，使红细胞溶解，白细胞形状更加明晰后，充入血细胞计数池，溶解，白细胞形状更加明晰后，充入血细胞计数池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量出每升血液中的白细胞数量 1.1.血细胞计数板，盖玻片血细胞计数板，盖玻片2.2.血红蛋白吸管具有血红蛋白吸管具有1010l l及及2020l l刻度刻度3.1ml3.1ml吸管，小试管，玻棒吸管，小试管，玻棒4.4.光学显微镜光学显微镜 器材器材 试剂试剂 白细

13、胞稀释液：白细胞稀释液：2%2%冰醋酸冰醋酸 标本来源标本来源 EDTA-K2EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血抗凝全血或毛细血管采血1.1.加稀释液：取白细胞稀释液加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml0.38ml于一干净小试管中。于一干净小试管中。2.2.加血：用血红蛋白吸管取全血加血：用血红蛋白吸管取全血2020l l，轻拭管尖外余血，准确调理血，轻拭管尖外余血，准确调理血液液面至液液面至2020l l处，将血红蛋白吸管插入白细胞稀释液中即小试处，将血红蛋白吸管插入白细胞稀释液中即小试管底部，迅速将血液放出，并用上清液吸吐两次洗净血红蛋白管底部，迅速将血液放出，并用上清液吸吐两次洗净血红

14、蛋白吸管内剩余血液。吸管内剩余血液。3.3.溶血：混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破坏。溶血：混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破坏。4.4.冲池：用一次性吸管取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池冲池：用一次性吸管取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否那么擦净重充，一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否那么擦净重充，室温程度静置室温程度静置2 23 3分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。 操作操作 5.5.计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，低倍镜下计数四角计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台

15、上，低倍镜下计数四角4 4个大方格内白细胞总数压线细胞：数上不数下，数左不数右个大方格内白细胞总数压线细胞：数上不数下，数左不数右6.6.计算：白细胞计算：白细胞/L=(N/4)/L=(N/4)101010610620=(N/20)20=(N/20)109109式中式中N N表示四个大方格内数得的白细胞总数。表示四个大方格内数得的白细胞总数。/4:/4:为平均每个大方格为平均每个大方格0.1mm30.1mm3稀释液内稀释液内 WBC WBC数。数。1010：将一个大方格白细胞数换算为：将一个大方格白细胞数换算为1 1l l 内的白细胞数。内的白细胞数。106106：1L=1061L=106l

16、l。2020：为血液稀释倍数。：为血液稀释倍数。白白白白白白白白白细胞计数区白细胞计数区白细胞计数操作步骤白细胞计数操作步骤 kok电子竞技方式kok电子竞技方式 左上：左上： 右上：右上：左下：左下： 右下：右下：换算公式：换算公式：白细胞数白细胞数WBCWBC：_109/L109/L 参考值参考值 成人：成人： 4 41010109/L109/L 新生儿：新生儿L109/L1 1、EDTA-K2EDTA-K2抗凝全血运用前必需混匀。抗凝全血运用前必需混匀。2 2、计数盘和盖玻片在运用前需用纱布擦拭干净。、计数盘和盖玻片在运用前需用纱布擦拭干净。3 3、血红蛋白吸管内腔要枯燥，否那么会

17、影响吸血量。、血红蛋白吸管内腔要枯燥，否那么会影响吸血量。4 4、在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否那么因、在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否那么因 RBCRBC残存而干扰计数使结果偏高。残存而干扰计数使结果偏高。5 5、显微镜调理：光镜光圈调暗，光源可调亮，微调计数。、显微镜调理：光镜光圈调暗，光源可调亮，微调计数。6 6、用好的器材及时清洗、用好的器材及时清洗HbHb吸管、计数盘、盖玻片、吸管吸管、计数盘、盖玻片、吸管 本卷须知本卷须知 实验kok电子竞技留意学号，kok电子竞技下次实验交1 原理0.5分2 简单步骤0.5分3 实验结果2分 原始数据、最后kok电子竞技各1分4 分析讨论2分 附注 1、实验操作不考核，但实验成果占整个实验诊断成果总分的15%，包括实验kok电子竞技成果及平常表现。 2、共4次实验，当堂的实验kok电子竞技在下次的实验课交，最后一次实验不要求完成实验kok电子竞技。 3、实验纪律、值日安排