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5、病原性球菌检验技能训练2．熟练革兰染色技术的标准化操作3．掌握常见病原性球菌的鉴定要点1、学会病原性球菌的形态学鉴定。4.养成认真、细致、精益求精的工作作风实训物品：菌种：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌试剂：革兰染液一套、载玻片、3%H2O2、抗凝人血浆培养基：MH琼脂平板、血平板、甘露醇发酵管实训内容一、细菌分离培养二、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌菌落观察。三、细菌形态学鉴定——染色镜检。四、细菌生化鉴定菌种培养基培养接种技术金黄色葡萄球菌血平板35℃需氧培养18-20小时

分区划线接种技术表皮葡萄球菌血平板35℃需氧培养18-20小时肺炎链球菌血平板35℃5-10%CO2培养18-20小时一、细菌分离培养二、细菌菌落观察观察项目：大小、形态、边缘、表面（光滑、粗糙、粘液型）、透明度、颜色、溶血性试验菌种BA上菌落特征金黄色葡萄球菌1-2mm圆形凸起边缘整齐不透明的金黄色光滑型菌落，有β溶血环表皮葡萄球菌1-2mm圆形凸起边缘整齐不透明的白色光滑型菌落，无溶血现象肺炎链球菌1-2mm表面扁平、边缘整齐、不透明的灰白色光滑型菌落，有α溶血环三、革兰染色镜检1、操作：每个同学对一个菌种进行革兰染色镜检，2人次/菌种/组2、记录结果：形态、排列、颜色、染色性、特殊结构菌种/观察项目金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌肺炎链球菌形态球形球形球形排列葡萄串状葡萄串状呈双排列颜色紫色紫色紫色染色性G+G+G+1、触酶试验：玻片法（金、表、肺链）2、血浆凝固酶试验：玻片法（金、表）3、新生霉素药敏

：MH培养基—密集划线接种：表葡

4、胆汁溶菌试验

：肺链：菌落法—单菌落+10%去氧胆酸钠---15分钟后观察5、optochin药敏

：血平板---密集划线接种：肺链6、甘露醇发酵试验：液体培养基接种法（金、表）四、生化鉴定--（一）实验项目生化试验金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌肺炎链球菌触酶试验??????血浆凝固酶试验????胆汁溶菌试验??新生霉素药敏试验??奥普托欣药敏试验??甘露醇发酵试验????生化试验金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌肺炎链球菌触酶试验++-血浆凝固酶试验+-胆汁溶菌试验+四、生化鉴定-（二）生化试验结果方法：背面量取抑菌环，读整数mm直径≤16mm耐药

>16mm敏感新生霉素敏感试验

结果：表皮葡萄球菌：敏感（S）方法：背面量取抑菌环，读整数mm抑菌环直径>14mm：S奥普托欣敏感试验

结果：肺炎链球菌：敏感（S）甘露醇发酵实验金黄色葡萄球菌+表皮葡萄球菌-金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌菌落BA：金黄色、β溶血的光滑型菌落BA：白色光滑型菌落，无溶血现象镜下G+、球形、葡萄串状G+、球形、葡萄串状触酶++血浆凝固酶+-新生霉素敏感试验SS甘露醇发酵+-鉴别要点总结肺炎链球菌菌落表面扁平、灰白色光滑型菌落，有α溶血环镜下G+、球形、呈双排列触酶

-奥普托欣药敏试验S胆汁溶菌

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