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P1-2样品的前处理方法主讲教师孙清荣教学目标①掌握药物分析的基本工作程序；②药物分析前处理的方法分为两大类：不经有机破坏的分析方法；经有机破坏的分析方法及其原理；技能目标：①掌握药物分析的基本工作程序；②掌握药物分析前处理的方法分为两大类：不经有机破坏的分析方法；经有机破坏的分析方法及其技能；一、概述药检工作中经常会遇到一些含卤素或含金属的有机药物，由于其所含金属或卤素在药物分子结构中结合的牢固程度不同，需要采用不同的方法对这些有机药物进行适当地处理，才能进行定样分析。对于有机卤素类药物，虽然卤素原子均直接与碳原子相连，但与碳原子结合的牢固程度取决于卤素在有机药物中的位置。如果卤素原子和脂肪碳链相连接，则结合不牢固，若卤素原子与芳环相连接，则结合较为牢固；而含金属元素的有机药物，如果金属原子不直接与碳原子相连，如一些有机酸及酚的金属盐或配位化合物，通常也称为含金属的有机药物，其分子结构中的金属原子结合不够牢固，在水溶液中即可离解出金属离子，若有机结构部分不干扰分析时，可在溶液中直接进行其金属的鉴别或含量测定；如果金属原子直接与碳原子以共价键相连接，如卡巴胂等，这类药物通常称为有机金属药物，由于共价键结合比较牢固，金属原子在溶液中一般不能解离成离子状态，所以应该根据共价键的牢固程度，选择适当的方法，将金属转变为适于分析的状态，如无机的金属盐或金属离子，再进行金属的鉴别或含量测定。对于含金属或卤素的有机药物分析前处理的方法分为两大类：①不经有机破坏的分析方法；②经有机破坏的分析方法。二、不经有机破坏的分析方法（一）直接测定法凡金属原子不直接与碳原子相连的含金属的有机药物或某些金属原子虽直接与碳原子相连，但结合不牢固的有机金属药物，它们在水溶液中可以电离，因而不需有机破坏，可直接选用适当的方法进行测定。例如抗贫血药富马酸亚铁，由于其在水中几乎不溶而能溶于热稀矿酸，同时分解释放出亚铁离子，可选用硫酸铈滴定液进行滴定，指示剂邻二氮菲与亚铁离子形成红色配位化合物，遇微过量氧化剂（硫酸铈）即被氧化生成浅蓝色高铁离子配合化合物指示终点，而此时所生成的富马酸没有干扰。（一）直接测定法

凡金属原子不直接与碳原子相连的含金属的有机药物或某些金属原子虽直接与碳原子相连，但结合不牢固的有机金属药物，它们在水溶液中可以电离，因而不需有机破坏，可直接选用适当的方法进行测定。例如抗贫血药富马酸亚铁，由于其在水中几乎不溶而能溶于热稀矿酸，同时分解释放出亚铁离子，可选用硫酸铈滴定液进行滴定，指示剂邻二氮菲与亚铁离子形成红色配位化合物，遇微过量氧化剂（硫酸铈）即被氧化生成浅蓝色高铁离子配合化合物指示终点，而此时所生成的富马酸没有干扰。中国药典（2005年kok电子竞技）富马酸亚铁含量测定方法如下：取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸15m1，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2滴，立即用硫酸铈滴定液（0.1mol／L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫酸铈滴定液（0.1mol／L）相当于16.99mg的C4H2FeO4。（二）经水解后测定法

1．直接回流后测定法本法适用于结构中卤素原子结合不牢固的一类含卤素的有机药物，如卤素直接和脂肪碳链相连的药物。通过将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中，加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后，加热回流使其水解，将有机结合的卤素经水解作用转变为无机的卤素离子，然后选用间接银量法进行测定.常用的药用辅药三氯叔丁醇，中国药典（2005年kok电子竞技）对其进行含量测定就是将三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流使分解产生氯化钠，与硝酸银生成氯化银沉淀，过量的硝酸银则用硫氰酸铵液回滴定。测定方法如下：

取本品约0.1g，精密称定，加乙醇5ml，溶解后，加20％氢氧化钠溶液5m1，加热回流15min，放冷，加水20ml与硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液（0.1ml/L）30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯5ml，密塞、强力振摇后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于6.216mg的C4H7Cl3?1/2H20。本法通过将含有机药物与定量硫酸共沸水解，然后剩余的酸以氢氧化钠液滴定。如中国药典（2005年kok电子竞技）收载的硬脂酸镁的含量测定方法，就是将硬脂酸镁与硫酸液共沸、水解生成硬脂酸和硫酸镁，然后回滴剩余硫酸．具体方法如下：2．用硫酸水解后测定法取硬脂酸镁约1.0g，精密称定，精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）50ml，煮沸至油层澄清，继续加热10min，放冷，加甲基橙指示液1～2滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1.0ml的硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于2.016mg的MgO。

当卤素碘与芳环直接相连时，由于分子中碳－碘键结合较牢固，需在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）回流，使碳一碘键断裂，形成无机碘化物后测定。中国药典（2005年kok电子竞技）收载的泛影酸、胆影酸、碘番酸、胆影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用碱性还原后测定。以泛影酸含量测定为例，其测定方法为：（三）经氧化还原后测定法１．碱性还原后测定

取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠试液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸5m1与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml的硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于20.46mg的C11H9I3N2O42．酸性还原后测定法

碘番酸也可以在醋酸酸性条件下用锌粉还原，使碳一碘键断裂，形成无机碘化物后用银量法测定。日本药局方中就是采用酸性还原后进行测定的。3．汞齐化法

汞齐化法是含汞的有机药物分析前处理的一种常用方法。其原理是：在酸性或碱性溶液中，加锌粉、加热回流，将药物中有机结合的汞还原析出金属汞，并与过量的锌生成锌汞齐。然后将锌汞齐溶于硝酸后，再选用适当的方法测定汞的含量，并换算成含汞有机药物的含量。如醋酸苯汞的含量测定方法如下：取本品约0.5g，精密称定，置100ml烧瓶中，加水15ml，甲酸5ml与锌粉1g，附回流冷凝器，煮沸30min。放冷，滤过，滤纸和锌汞齐用蒸馏水洗涤至洗液对石蕊试纸不显酸性反应。将锌汞齐溶解在稀硝酸（1:2）40ml中，置蒸气浴上加热3min，加尿素0.5g和足够的高锰酸钾试液至显桃红色。冷却后，加过氧化氢溶液脱色，加硫酸铁铵指示剂1ml，用硫氰酸铵滴定液（0.1mol/L）滴定，即得。每1ml硫氰酸铵液（0.1mol/L）相当于16.84mg的C8H8O2Hg。4．利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量

（1）含锑药物：对于含用五价锑有机药物，可以利用可游离的Sb5+的氧化性，在酸性液中氧化碘化钾，并定量析出碘，可用硫代硫酸钠液滴定。例如葡萄糖酸锑钠的含量测定法（中国药典，2005年kok电子竞技）为：取本品约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水100ml、盐酸15ml与碘化钠试液10ml，密塞、振摇后，在暗处静置10min，用硫代硫酸钠滴定液（0.lmol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于6.088mg的Sb。（2）含铁药物：将含铁药物加酸溶解后，便游离出Fe3+，利用Fe3+在酸性溶液中氧化碘化钾，析出的碘可用硫代硫酸钠液滴定以测定含量。

三、经有机破坏的分析方法

有些药物如含有金属的有机药物以及有机卤素药物结构中的金属原子，由于其结构牢固，采用上述方法不能够将药物分子破坏，此时必须采用有机破坏的分析方法，使有机结合状态的金属及卤素转变为可测定的无机化合物，再选用合适的分析方法进行测定。

药物分析中使用的有机破坏方法有湿法破坏、干法破坏及氧瓶燃烧三种方法。（－）湿法破坏

根据所用试剂的不同，湿法破坏可分为以下几种

硫酸-硫酸盐法

本法常用于含砷或锑有机药物的破坏分解。经本法破坏分解所得的金属离子，多为低价态。本法所用硫酸盐多为硫酸钾。加入硫酸盐的目的，是为了提高硫酸的沸点，以使样品破坏完全。同时，也可防止硫酸在加热过程中过早地分解为三氧化硫。由于在有机物破坏时须经炭化过程，最后才得到低价态的三价砷或锑离子。所以在使用该法破坏低碳化合物时，宜添加适量的淀粉等多碳化合物，以保证在破坏过程中，金属离子都转变为低价态。硝酸-硫酸法

本法适用于大多数有机药物的破坏。经本法破坏分解所得的无机金属离子均为高价态。但是本法不适用于含碱土金属有机药物的破坏。因为碱土金属可与硫酸形成不溶性的硫酸盐，能够吸附被测定的金属离子，使得测定结果偏低。硝酸-高氯酸法本法适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，但对含氮杂环药物的破坏不够完全。经本法破坏分解所得的无机金属离子，一般为高价态。本法破坏能力强，反应剧烈。进行破坏时，必须注意切勿将容器中的内容物蒸干，以免发生爆炸。除了以上三种试剂组合的方式之外，还有硝酸-硫酸-高氯酸法、硫酸-过氧化氢法、硫酸-高锰酸钾法等，其原理就是将有机药物在强氧化剂存在下，加热破坏分解完全，破坏后，金属在溶液中一般以高价态存在。

由于湿法破坏使用到数倍于样品的强酸，故该法使用的仪器一般为硅玻璃或硼玻璃制成的凯氏烧瓶；使用的试剂及蒸馏水均不应含有被测金属离子或干扰测定的其他金属离子等组分。操作时应在通风橱内进行。本法需要按相同条件进行空白试验校正。关于样品的取用量，应视被测含金属有机药物中所含金属元素的量和破坏后所用测定方法而定。一般来说，含金属元素量在10～100μg范围内时，取样量为10g；如果测定方法灵敏度较高，取样量可相应减少。对于生物样品，一般血样10～15ml或尿样50m1。（二）干法破坏干法破坏是将有机物通过灼烧灰化以达分解的目的。本法适用于湿法不易破坏完全的有机物（如含氮杂环类有机药物）以及某些不能用酸进行破坏的有机药物，不适用于含有易挥发性金属（如汞、砷等）组分的有机药物的破坏。

干法破坏操作简便，通常将适量样品置于瓷坩埚或镍坩埚、铂坩埚中，加以适量无水碳酸钠或轻质氧化镁等以助灰化，混合均匀后，先小火加热，使样品完全炭化，然后放入高温炉中灼烧，使其灰化完全，即可。

干法破坏需要高温灼烧使其灰化，灰化完全与否，直接影响测定结果的准确性。灰化是否完全可采用下列方法检验：将灰分放冷后，加入稍过量的稀盐酸-水（1:3）或硝酸-水（1:3）的混合液，振。鄄烊芤菏欠癯噬蛴形抻谢锊蝗艹煞执嬖。若呈色或有不溶有机物，说明灰化尚未完全，可于水浴上将溶液蒸干，并用小火炭化后，再进行灼烧至灰化完全。但灼烧时应控制温度在420℃以下，以防止某些被测金属化合物的挥发，使得测定结果偏低。干法破坏后，所得灰分往往不易溶解，此时切勿弃去。（三）氧瓶燃烧法

氧瓶燃烧法（oxygenflaskcombustionmethod）系将有机药物放入充满氧气的燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的燃烧产物采用适当的吸收液吸收后，选择适宜的分析方法进行鉴别、检查或测定含卤素或含硫、氮、硒等其它元素的有机药物。

氧瓶燃烧法是快速破坏有机物的简单方法，由于该法操作简单方便，且不需要复杂设备，仅靠燃烧就能将有机药物中的待测元素定量分解成离子型，所以各国药典都收载该方法。氧瓶燃烧法一般分为以下四步：1.燃烧瓶选择氧瓶燃烧法通常使用500ml、1000ml或2000ml磨口、硬质玻璃锥形瓶作为燃烧瓶，其瓶塞应严密、空心、底部熔封直径为1mm铂丝一根，铂丝下端做成网状或螺旋状，长度约为瓶身长度的2/3，（如图2-1A）。使用燃烧瓶前，应检查瓶塞是否严密，否则可能造成测定结果偏低。燃烧瓶应根据被燃烧分解样品的量来选择合适的容积大小。样品量为10～20mg使用500ml燃烧瓶，样品量为200mg及以上时可选用1000ml或2000ml燃烧瓶。氧瓶燃烧法可以破坏固体样品或液体样品，但两类样品在称量和固定上有所区别。称取固体样品时，应先研细样品，再按药典规定的量精密称取样品置于无灰滤纸（图2-1B）中心，按虚线折叠（图2-1C）后，固定于铂丝下端的网内或螺旋处，并使尾部露出；对于液体样品时，则可以在用透明胶纸和无灰滤纸做成的特殊纸袋中称样。2.样品称量和固定纸袋制作纸袋应按药典规定的方法制作。首先将透明胶纸剪成规定大小和形状（图2-1D），中部贴一条约16mm×6mm的无灰滤纸条，并于其突出部分贴－6mm×35mm的无灰滤纸条（图2-1E），将胶纸对折，紧粘住底部及另一边，并使上口敞开（图2-1F）。称量称量时首先精密称定纸袋重量，用滴管将供试品从上口滴在无灰滤纸条上，立即捏紧粘住上口，再次精密称定含有液体样品的纸袋重量，两次重量之差即为供试品量。然后将含有液体供试品的纸袋固定于铂丝下端的网内或螺旋处，并使尾部露出。3．吸收液的选择

吸收液应根据被测物质的种类及所用分析方法来选择。良好的吸收液应能够定量地吸收样品经燃烧分解所产生的各种价态的元素，并能使其转变为便于测定的价态。一般用于卤素、硫、硒等的鉴别、检查及含量测定的吸收液多数是水或水与氢氧化钠的混合液，少数是水-氢氧化钠-浓过氧化氢的混合液或硝酸溶液（1→30）。中国药典（2005年kok电子竞技）中采用氧瓶燃烧法破坏后测定含量的部分药物及所用吸收液归纳于表2-2。表2-2氧瓶燃烧法破坏药物时采用的吸收液药物名称测定元素吸收液甲状腺片碘0.4%NaOH试液50ml盐酸胺碘酮碘NaOH试液2ml与水10ml的混合液碘苯酯注射液碘NaOH试液2ml与水10ml的混合液磺溴酞钠硫浓H2O2溶液0.5ml与水30ml的混合液磺溴酞钠溴0.4%NaOH10ml，浓H2O2液0.5ml，水10ml的混合液4．燃烧分解操作法

在燃烧瓶内加入适量规定的吸收液，并将瓶口用水湿润；小心急速通入氧气约1min（通气管口应接近液面，使瓶内空气排。，立即用表面皿覆盖瓶口，备用；点燃包有样品的滤纸包或纸袋尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，用水少量封闭瓶口，待燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振。股傻难涛硗耆胛找褐，放置15min，用少量水冲洗瓶塞及铝丝，合并洗液及吸收液。同法另作空白试验。然后按规定的方法进行检查或测定。

使用氧瓶燃烧法进行样品分析前处理时，操作前，应将燃烧瓶洗涤干净，不得残留有机溶剂，也不能用有机润滑剂涂抹瓶塞；通入燃烧瓶的氧气一定要充足，确保燃烧完全。燃烧产生的烟雾应完全被吸收液吸收。注意防爆。一般情况下，由于取样量很少，燃烧又在瞬间即可完成，因此，按规定方法操作，几乎没有爆破危险。由于燃烧过程中产生的热气可使塞子被顶动，因此点燃后，必须立即用手按紧瓶塞，直到火焰熄灭为止。

由于含氟有机药物燃烧后生成的氟化氧气体可腐蚀玻璃，同时与玻璃中的硼生成的硼氟化物（如BF3）在水溶液中仅部分解离成氟离子而使氟的测定结果偏低。所以测定氟化物时应用石英燃烧瓶。谢谢THANKYOU